En spektrofotometer används för att bestämma koncentrationen av vissa föreningar, såsom protein, i en lösning. I allmänhet skiner ett ljus genom en kyvett fylld med ett prov. Mängden ljus som absorberas av provet mäts. Eftersom föreningar absorberar ljus i olika spektralområden måste den rätta våglängden ställas in för analysen. Det finns många sätt att beräkna koncentrationen av okända prover genom spektrofotometri, men med referensstandarder ger bästa noggrannhet. Vidare anger standarder också om spektrofotometern störs eller andra problem med analysen.
Beräkning genom raklinjekvationer
Analysera referensstandarder i början av analysen. Standarder är kända koncentrationer och används för att kalibrera utrustning och kontrollera noggrannhet. Alla prover bör omfattas av standardernas arbetsområde. Om inte, måste provet spädas eller koncentrationen av standarder ökar.
Gör ett scatterdiagram eller linjediagram med standardkoncentration och absorptionsvärden. Koncentrationen kommer att ligga på y-axeln, absorptionen på x-axeln. Standarden är till exempel 1 ppm, 2,5 ppm och 5 ppm. Den givna absorptionshastigheten var 1 ppm = .25, 2,5 ppm = .5 och 5 ppm = .75.
Formatera trendlinjen för att visa en ekvation i diagrammet. Ekvationen kommer att visa formeln y = mx + b. Till exempel, genom att använda standarderna i steg 2 är ekvationen y = 1224x + 0,1531. De flesta trendlinjerna avlyssnas vid noll, men det beror på analysmetoden och R-kvadratvärdet.
Analysera okända prover och spela in absorbansvärden.
Använd ekvationen (y = mx + b ) för att bestämma koncentrationen av prover.
Förstå rak linjejämförelse
Låt "Y" motsvara koncentrationen. Detta är vad som ska lösas.
Låt "X" motsvara provets absorptionsgrad. Detta är absorptionen mätt av spektrofotometern.
Tillåt att "" motsvara lutningen och "b" för att motsvara y-avlyssningen. Båda ges, men om trendlinjen tvingades genom 0, blir "b" 0.
Lös för koncentration. Med hjälp av exemplet i steg 3, ersätt "x" som en given absorption av .563. Därför:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (koncentration) = .222011
Tips
Koncentrationsenheterna kommer att vara samma som standarderna. Exempelvis är enheter delar per miljon (ppm) eller delar per miljard (ppb).
Referensstandarder och prover är lätt smittade.
Varning
Läs alltid alla delar av analys eller metod före utveckling.
