I allmänhet behåller grampositiva bakterier det kristallvioletta färgämnet på grund av närvaron av ett tjockt lager av peptidoglykan i sin cellvägg. Detta lager är ansvarigt för den positiva laddningen, vilket gör att dessa bakterier kan behålla kristallviolett-jodkomplexet som bildas under färgningsprocessen. Därefter ser de grampositiva cellerna mörklila eller blå ut när de observeras under ett mikroskop.
Å andra sidan har gramnegativa bakterier ett tunnare peptidoglykanlager och ytterligare ett yttre membran. Denna skillnad i cellväggsstruktur leder till en förlust av det kristallvioletta färgämnet under alkoholtvättsteget i Gram-färgningsprotokollet. Följaktligen behåller inte gramnegativa bakterier kristallviolett-jodkomplexet och tar sedan upp motfärgningen, typiskt safranin. Som ett resultat blir gramnegativa celler röda eller rosa när de observeras under mikroskop.
Medan Gram-färgningsproceduren effektivt skiljer mellan Gram-positiva och Gram-negativa bakterier, finns det några undantag där proceduren kan ge oväntade resultat. Dessa undantag inkluderar:
Syrafasta bakterier:Vissa bakterier, som de som tillhör släktet Mycobacterium, har en vaxartad cellvägg som hindrar det kristallvioletta färgämnet från att tränga in i cellerna. Som ett resultat är dessa bakterier inte lätta att visualisera med Gram-färgningsproceduren och kräver speciella färgningstekniker, som Ziehl-Neelsen-färgningen, för att observeras.
Gram-variabla bakterier:Vissa bakteriearter kan uppvisa variationer i sina Gram-färgningsegenskaper beroende på deras tillväxtförhållanden eller utvecklingsstadier. Till exempel kan vissa bakterier vara grampositiva i vissa stadier av sin livscykel och gramnegativa i andra.
Ovanligt färgade bakterier:I sällsynta fall kan vissa bakteriearter visa ovanliga Gram-färgningsresultat på grund av unika cellväggssammansättningar eller variationer i deras kemiska sammansättning. Dessa bakterier kan verka delvis färgade eller mellanliggande i sin färgningsreaktion, vilket gör deras klassificering som antingen Gram-positiva eller Gram-negativa utmanande.
Sammanfattningsvis är Gramfärgningsproceduren en pålitlig teknik som effektivt skiljer mellan de flesta grampositiva och gramnegativa bakterierna baserat på skillnader i deras cellväggsstruktur. Det finns dock undantag där vissa bakteriearter kanske inte överensstämmer med de typiska Gram-positiva eller Gram-negativa färgningsmönstren, vilket kräver alternativa färgningsmetoder eller detaljerad analys för korrekt klassificering.
