1. Celllys:
* Breaking Open Cells: Centrifugering används för att bryta öppna celler (som blodceller, bakterier eller växtceller) för att frigöra DNA. Detta kan göras genom fysiska metoder som virvel eller sonikering, men centrifugering hjälper till att separera cellavfallet från det frisatta DNA.
* Ta bort cellavfall: Efter lysering centrifugeras provet med relativt låg hastighet. Tyngre cellavfall, organeller och proteiner sätter sig i botten och bildar en pellet, medan DNA förblir i supernatanten (vätskan ovanför pelleten).
2. DNA -utfällning:
* separera DNA från lösning: Efter att DNA har fällts ut ur lösningen (vanligtvis med användning av etanol eller isopropanol) används centrifugering med högre hastighet för att pellet DNA. Pelleten tvättas sedan med en lösning som etanol för att avlägsna eventuella återstående föroreningar.
* Koncentration: Centrifugering kan också användas för att koncentrera DNA genom att snurra ner en stor volym lösning till en mindre volym. Detta är användbart när du arbetar med små mängder DNA.
3. Rening:
* Ta bort föroreningar: Centrifugering används för att avlägsna föroreningar som proteiner, lipider och RNA, som ofta finns tillsammans med DNA. Olika centrifugeringsprotokoll med specifika hastigheter och buffertar används för att selektivt separera dessa föroreningar.
Sammanfattningsvis:
* cellstörning och avlägsnande av skräp: Centrifugering skiljer cellavfall från det frisatta DNA.
* DNA -utfällning och koncentration: Centrifugeringspellets DNA och hjälper till att koncentrera det.
* rening: Centrifugering skiljer föroreningar från DNA, vilket leder till ett renare och mer koncentrerat DNA -prov.
Genom att använda en kombination av dessa tekniker spelar centrifugering en viktig roll för att säkerställa en framgångsrik isolering och rening av DNA.
