Vad är kosmids?
Kosmider är hybridvektorer som kombinerar egenskaper hos plasmider och bakteriofager. De är i huvudsak plasmider som bär en specifik DNA -sekvens som kallas en "cos" -ställe, som härrör från Lambda -fagen.
Nyckelfunktioner:
* Stor klonkapacitet: Cosmids kan rymma DNA-skär på 35-45KB, betydligt större än kapaciteten hos de flesta plasmider (vanligtvis 10-15KB). Detta möjliggör kloning av större gener eller hela genom.
* Effektiv förpackning: "COS" -stället möjliggör förpackning av kosmid -DNA i lambda fagpartiklar. Denna process använder fagens förpackningsmaskiner, vilket möjliggör effektiv leverans av det rekombinanta DNA till bakterieceller.
* Valbara markörer: Cosmids bär valbara markörer, som antibiotikaresistensgener, vilket möjliggör identifiering av bakterieceller som innehåller den rekombinanta kosmiden.
Hur kosmider fungerar inom rekombinant DNA -teknik:
1. DNA -fragmentinsättning: DNA -fragmentet som ska klonas sätts in i den kosmidvektorn vid en specifik begränsningsplats.
2. Förpackning: Den rekombinanta kosmiden förpackas i Lambda -fagpartiklar med användning av ett specialiserat in vitro -förpackningsextrakt.
3. Infektion: De förpackade fagpartiklarna infekterar bakterieceller och levererar den rekombinanta kosmiden.
4. Replikering och urval: Kosmiden replikeras i bakteriecellen, och den valbara markören möjliggör val av bakterier som bär den rekombinanta kosmiden.
5. Återvinning av klonat DNA: Det klonade DNA kan återvinnas från bakteriecellerna för ytterligare analys eller tillämpningar.
Applikationer:
* Genomkartläggning och sekvensering: Kosmider har använts i stor utsträckning i genomkartläggning och sekvenseringsprojekt på grund av deras förmåga att klona stora DNA -fragment.
* genbibliotek: De används för att skapa genomiska bibliotek som innehåller stora fragment av DNA, som representerar hela genomet av en organisme.
* Funktionell genomik: Kosmider kan användas för att studera funktionen hos stora gener eller genkluster.
Fördelar med kosmids:
* Hög kloningskapacitet: Möjliggör kloning av stora DNA -fragment.
* Effektiv förpackning och leverans: Lambda -fagförpackningssystem säkerställer effektiv tillförsel till bakterieceller.
* Valbara markörer: Underlätta identifiering av bakterier som innehåller den rekombinanta kosmiden.
Begränsningar:
* Stor storlek: De är större än plasmider, vilket kan vara en nackdel för vissa kloningsförfaranden.
* Potentiell instabilitet: Stora skär kan ibland orsaka instabilitet i kosmiden.
Sammanfattningsvis är kosmider kraftfulla verktyg inom rekombinant DNA -teknik, vilket möjliggör kloning och manipulation av stora DNA -fragment, vilket gör dem väsentliga för olika tillämpningar inom genomisk forskning, genterapi och bioteknik.
