1. Stationär fas:
* Naturen hos den stationära fasen: Olika material som kiseldioxidgel, aluminiumoxid, cellulosa eller jonbyteshartser uppvisar olika polariteter och affiniteter för olika föreningar. Detta dikterar vilka föreningar som kommer att interagera starkare och därmed elutera senare.
* partikelstorlek och porositet: Mindre partiklar och högre porositet ger större ytarea för interaktion med analyt, vilket förbättrar separationseffektiviteten.
* Aktivitet i den stationära fasen: Kiseldioxidaktivitet kan justeras med varierande vatteninnehåll, vilket påverkar styrkan i interaktion med polära föreningar.
2. Mobil fas:
* Lösningsmedelens natur: Den mobila fasens polaritet påverkar dess eluerande kraft. Ett mer polärt lösningsmedel kommer att elutera polära föreningar snabbare, medan ett mindre polärt lösningsmedel kommer att behålla polära föreningar längre.
* lösningsmedelsstyrka: Starkare lösningsmedel interagerar starkare med analyten och eluerar dem snabbare. Detta kan justeras genom att använda olika lösningsmedel eller genom att blanda dem i olika förhållanden (gradienteluering).
* Flödeshastighet: En långsammare flödeshastighet möjliggör mer jämvikt mellan de stationära och mobila faserna, vilket resulterar i bättre separering. Men alltför långsam flödeshastigheter kan leda till bandbreddning.
3. Prov:
* Provstorlek: Större provstorlekar kan överbelasta kolumnen, vilket leder till dålig separering.
* Provkomposition: Komplexa blandningar kan vara svåra att separera och vissa komponenter kan störa varandra.
* lösligheten för provet: Provet ska vara lösligt i den mobila fasen för att säkerställa korrekt eluering.
4. Kolumndimensioner:
* Kolumnlängd: Längre kolumner ger mer ytarea för interaktion, vilket förbättrar separationen.
* kolonndiameter: En smalare kolumn ökar upplösningen men begränsar också provstorleken.
5. Temperatur:
* Temperaturen påverkar lösligheten för analyt och viskositeten för mobilfasen. Högre temperaturer leder vanligtvis till snabbare eluering och kan ibland förbättra separationen.
6. Andra faktorer:
* Tryck: Tillämpning av tryck kan öka flödeshastigheten, men det kan också påverka separationseffektiviteten.
* Kolumntyp: Olika kolumnkonstruktioner, såsom packade kolumner eller öppna rörformiga kolumner, kan påverka separationen.
Övergripande, framgångsrik separering i kolonnkromatografi förlitar sig på att välja rätt kombination av stationära och mobila faser, optimera driftsförhållandena och med tanke på provets egenskaper.
