En vertikal gelelektroforesenhet är en anordning som används i molekylärbiologi och biokemi för att separera molekyler, främst proteiner och nukleinsyror (DNA och RNA) , baserat på deras storlek och laddning .
Här är en uppdelning av dess nyckelfunktioner:
1. Komponenter:
* gelgjutningsfack: Detta har gelén, som är en porös matris som fungerar som separationsmediet.
* glasplattor: Två vertikala glasplattor smörgås gelén och skapar en smal kanal för provmigrering.
* buffertkamrar: Dessa innehåller elektroforesbufferten, som leder elektricitet och upprätthåller systemets pH.
* Elektroder: Ett par elektroder (anod och katod) genererar ett elektriskt fält som driver molekylerna genom gelén.
* Strömförsörjning: Ger en likström till elektroderna och skapar det elektriska fältet för separering.
* kam: Detta används för att skapa brunnar i gelén, där prover laddas.
2. Arbetsprincip:
* Gelén är vanligtvis tillverkad av polyakrylamid (Sida) eller agaros , med olika tätheter för att kontrollera porstorlek.
* Prover laddas i brunnar på toppen av gelén.
* När ett elektriskt fält appliceras migrerar molekyler genom gelén mot elektroden med motsatt laddning (positiv för negativt laddade molekyler och vice versa).
* Mindre molekyler migrerar snabbare Genom gelens porer, medan större molekyler möter mer motstånd och rör sig långsammare.
* Detta resulterar i separationsband Baserat på storlek, med de minsta molekylerna längst ner och de största i toppen.
3. Applikationer:
* proteinanalys: Bestämning av proteindorlek, renhet och närvaro.
* DNA -analys: Sekvensering, restriktionsfragmentlängd polymorfism (RFLP) -analys och kloning.
* RNA -analys: Utvärdera genuttryck och studera RNA -struktur.
4. Fördelar:
* Hög upplösning: Ger tydlig separering av molekyler med skillnader i svaga storlek.
* mångsidighet: Lämplig för olika typer av prover och applikationer.
* Kvantitativ analys: Bandintensitet kan användas för att mäta mängden för varje molekyl.
5. Begränsningar:
* Komplex installation: Kräver noggrann förberedelse och uppmärksamhet på detaljer.
* Tidskrävande: Elektroforesprocessen kan ta flera timmar.
* Begränsad kapacitet: Gelstorleken begränsar antalet prover som kan köras samtidigt.
Sammantaget är den vertikala gelelektroforesenheten ett viktigt verktyg för forskare inom olika områden, vilket ger värdefull insikt i sammansättningen och egenskaperna hos biologiska molekyler.
