Djurcellskultur är en komplex och känslig process som kräver noggrann kontroll av flera parametrar för optimal tillväxt. Dessa kan i stort sett kategoriseras enligt följande:
1. Fysiska parametrar:
* Temperatur: De flesta däggdjurscellinjer trivs vid 37 ° C. Detta är avgörande för optimal enzymatisk aktivitet och cellprocesser.
* ph: Celler kräver en något alkalisk miljö, vanligtvis mellan 7,2 och 7,4. Detta upprätthålls med buffertar i media.
* fuktighet: Hög luftfuktighet (vanligtvis cirka 95%) är avgörande för att förhindra avdunstning och upprätthålla rätt medievolym.
* Gaskomposition: Celler behöver syre för andning och CO2 för att upprätthålla pH. Detta tillhandahålls vanligtvis genom att inkubera celler i en fuktad inkubator med 5% CO2.
* Ytarea: Celler kräver tillräckligt ytarea för fästning och tillväxt. Detta uppnås genom olika metoder som kolvar, plattor med flera brunnar eller mikroarrier.
2. Mediekomposition:
* grundläggande näringsämnen: Media bör innehålla viktiga näringsämnen som aminosyror, vitaminer, glukos och salter för att stödja celltillväxt och metabolism.
* Tillväxtfaktorer: Vissa celltyper kräver specifika tillväxtfaktorer, som insulin eller epidermal tillväxtfaktor (EGF), för att stimulera spridning.
* serum: Serum läggs ofta till media för att tillhandahålla viktiga näringsämnen och tillväxtfaktorer, samt proteiner för fästning och skydd. Serum är emellertid en komplex och odefinierad blandning, som kan införa variation och potentiella föroreningar.
* buffertar: Buffertar som bikarbonat eller HEPE används för att bibehålla pH -stabilitet.
* Antibiotika: Antibiotika tillsätts ibland för att förhindra bakteriell kontaminering, men de kan också påverka celltillväxt och bör användas med försiktighet.
* Andra tillsatser: Beroende på cellinjen och tillämpningen kan andra tillsatser krävas, som kelaterande medel eller antioxidanter.
3. Cellinjespecifika faktorer:
* Passationsnummer: Celler har en begränsad livslängd och deras tillväxtegenskaper förändras med ökande passagelantal.
* Subkulturfrekvens: Frekvensen för att dela cellerna (subkulturering) beror på cellinjen och dess tillväxthastighet.
* Såddensitet: Det initiala antalet celler som ymts i ett kulturkärl påverkar tillväxt och cellmorfologi.
* Stressfaktorer: Celler kan stressas av faktorer som överbeloppning, näringsämne utarmning eller pH -fluktuationer, vilket kan påverka tillväxten negativt.
4. Aseptisk teknik:
* sterilitet: Att upprätthålla en steril miljö är avgörande för att förhindra förorening från bakterier, svampar eller virus. Detta handlar om att använda steril utrustning och procedurer.
* Förebyggande föroreningar: Regelbunden övervakning för förorening och användning av lämpliga steriliseringstekniker är viktiga för framgångsrik cellkultur.
5. Utrustning:
* inkubator: En fuktad inkubator som upprätthåller rätt temperatur och gaskomposition.
* Cell Culture Hood: En laminär flödeshuv ger en steril miljö för hantering av celler.
* mikroskop: Mikroskop är viktiga för att visualisera cellmorfologi och bedöma tillväxt.
* pipetter och sterila behållare: Dessa behövs för hantering och överföring av cellkulturmedier och celler.
Genom att noggrant kontrollera alla dessa parametrar kan du skapa en optimal miljö för djurcellskultur, vilket möjliggör effektiv tillväxt och framgångsrika experiment. Kom dock ihåg att varje cellinje har unika krav och känsligheter, vilket kräver ytterligare optimering och specialiserade protokoll för optimal tillväxt.
