• Home
  • Kemi
  • Astronomien
  • Energi
  • Naturen
  • Biologi
  • Fysik
  • Elektronik
  •  Science >> Vetenskap >  >> Biologi
    Vad är de rätta sekvenserna av händelser i produktionsrekombinant DNA?
    Här är en uppdelning av de viktigaste stegen för att producera rekombinant DNA, tillsammans med några viktiga punkter:

    1. Isolering av genen av intresse:

    * Källa: Den önskade genen erhålls från dess ursprungliga organisme (t.ex. bakterier, växt, djur).

    * Metoder: Detta kan innebära:

    * Restriktionsenzym matsmältning: Specifika enzymer skär DNA vid exakta sekvenser.

    * PCR (polymeraskedjereaktion): Förstärker ett specifikt DNA -fragment.

    2. Förberedelse av vektorn:

    * Val av vektor: En lämplig vektor (t.ex. plasmid, virus) väljs. Vektorn måste kunna replikera i värdcellen.

    * Restriktionsenzym matsmältning: Vektorn skärs med samma begränsningsenzym som används för genen av intresse, vilket skapar kompatibla ändamål.

    * ligering: Intressegenen och den öppnade vektorn kombineras med användning av DNA -ligas, som tätar DNA igen.

    3. Transformation:

    * Introduktion i värdcellen: Det rekombinanta DNA införs i en värdcell (t.ex. bakterier, jäst).

    * Metoder: Vanliga metoder inkluderar:

    * kemisk transformation: Celler behandlas med kemikalier som ökar permeabiliteten för DNA.

    * Elektroporation: En kort elektrisk puls skapar tillfälliga porer i cellmembranet.

    4. Val av transformerade celler:

    * Markörgener: Vektorn bär ofta markörgener (t.ex. antibiotikaresistens) som möjliggör identifiering av celler som innehåller det rekombinanta DNA.

    * tillväxt på selektiva media: Celler odlas på media som innehåller antibiotikumet. Endast celler med markörgenen kommer att överleva och multiplicera.

    5. Produktion av genprodukten:

    * Uttryck: De transformerade cellerna odlas i stora mängder och genen av intresse uttrycks.

    * Proteinproduktion: Genens DNA transkriberas till mRNA, som sedan översätts till det önskade proteinet.

    * rening (valfritt): Om proteinet är den önskade produkten kan det renas för att ta bort andra cellulära komponenter.

    Nyckelpunkter att komma ihåg:

    * Begränsningsenzymer: Dessa fungerar som molekylär sax, skär DNA vid specifika sekvenser, vilket lämnar "klibbiga ändar" som kan baspar med kompatibla ändar på andra DNA-fragment.

    * vektorer: Det här är fordon som bär genen av intresse in i värdcellen. Plasmider är cirkulära DNA -bitar som replikerar oberoende i bakterier. Virala vektorer kan integrera genen i värdens genom.

    * Markörgener: Dessa gener möjliggör val av transformerade celler.

    * Transformation Effektivitet: Processen att införa främmande DNA i celler är inte 100% effektiv. Inte alla celler kommer framgångsrikt att ta upp det rekombinanta DNA.

    Låt mig veta om du vill ha mer information om någon specifik aspekt av denna process!

    © Vetenskap https://sv.scienceaq.com