1. Erkännande Sekvens:
* Specificitet: Varje begränsningsenzym känner igen en specifik, kort sekvens av DNA -nukleotider. Denna sekvens är vanligtvis 4-8 baspar lång och kallas -igenkänningssekvensen eller begränsningssidan .
* palindromisk natur: Många igenkänningssekvenser är palindromiska, vilket innebär att de läser samma bakåt och framåt på motsatta DNA -strängar. Till exempel känner enzymet EcoRI igen sekvensen GAATTC, som är densamma om du läser den från höger till vänster på den kompletterande strängen (CTTAAG).
2. Klyvning:
* skärning: När restriktionsenzymet hittar sin igenkänningssekvens skär det DNA -molekylen vid en specifik punkt inom den sekvensen.
* Sticky Ends vs. Blunt Ends: Det sätt som ett restriktionsenzymnedskärningar kan ge antingen "klibbiga ändar" eller "trubbiga ändar."
* Sticky Ends: Enzymet skär DNA-strängarna vid olika positioner, vilket lämnar korta enkelsträngade överhäng som kan baspar med komplementära överhäng från andra DNA-molekyler klippta med samma enzym. Detta är användbart för att skapa rekombinanta DNA -molekyler.
* trubbiga slutar: Enzymet skär båda DNA -trådarna i samma position och lämnar inga överhäng.
Sammanfattningsvis:
Följande faktorer avgör hur ett begränsningsenzym kommer att minska DNA:
* Enzymets specifika igenkänningssekvens.
* Platsen för den sekvensen inom DNA -molekylen.
* Det specifika klyvningsmönstret för enzymet (klibbiga ändar kontra trubbiga ändar).
Exempel:
Enzymet EcoRI skär DNA vid sekvensen Gaattc och producerar klibbiga ändar. Detta innebär att det kommer att klippa alla DNA-molekyler som innehåller den sekvensen, och de resulterande DNA-fragmenten kommer att ha enkelsträngade överhäng som kan användas för kloning eller andra genetiska manipulationer.
