1. Begränsningsenzymer:
* Funktion: Handla som molekylär sax och skär DNA vid specifika sekvenser som kallas restriktionsställen.
* Roll i kloning:
* Skär genen av intresse: De klippte DNA som innehåller den önskade genen från givarorganismen.
* skär vektorn: De skär vektor -DNA (t.ex. plasmid) på ett specifikt ställe, vilket skapar ett utrymme för att genen ska sättas in.
2. DNA -ligas:
* Funktion: Handlar som molekyllim och förenar två DNA -fragment tillsammans.
* Roll i kloning:
* Infoga genen i vektorn: Efter att genen och vektorn har skärts med samma begränsningsenzym, ansluter DNA -ligas de två bitarna tillsammans, vilket skapar en rekombinant DNA -molekyl.
3. Omvänd transkriptas:
* Funktion: Skapar en DNA -kopia av en RNA -molekyl (cDNA).
* Roll i kloning:
* kloningsgener från RNA: Det är viktigt för kloning av gener uttryckta som RNA, såsom gener som producerar proteiner. Omvänd transkriptas omvandlar RNA till DNA, som sedan kan sättas in i en vektor.
4. Polymeraskedjereaktion (PCR):
* Funktion: Förstärker specifika DNA -sekvenser.
* Roll i kloning:
* Skapa flera kopior av genen: PCR tillåter forskare att generera tillräckligt med kopior av genen av intresse för framgångsrik kloning.
* screening för kloner: PCR kan användas för att identifiera kloner som innehåller den önskade genen.
5. Andra enzymer:
* DNA -polymeras: Används i PCR för att syntetisera nya DNA -strängar.
* exonukleaser: Ta bort nukleotider från ändarna på DNA -strängar, som ofta används för att framställa DNA för kloning.
* endonukleaser: Skär DNA vid specifika interna sekvenser, användbara för att modifiera DNA -fragment.
Sammantaget: Enzymer är väsentliga verktyg för den exakta manipulationen av DNA vid kloning. De tillåter forskare att isolera specifika gener, sätta in dem i vektorer och förstärka de önskade DNA -sekvenserna, vilket gör det möjligt att skapa kopior av gener och i slutändan uttrycka dem i olika organismer.
