1. DNA -sekvensering:
* Direkt sekvensering: Detta är den vanligaste och enkla metoden. DNA -intresset amplifieras med användning av PCR (polymeraskedjereaktion) och sekvenseras sedan med hjälp av automatiserade sekvenseringstekniker. Sekvensen jämförs sedan med en referenssekvens (vanligtvis en vildtyp eller normal sekvens). Eventuella skillnader i sekvenserna indikerar en mutation.
* nästa generations sekvensering (NGS): Detta är en sekvenseringsteknik med hög genomströmning som kan sekvensera miljoner DNA-fragment samtidigt. NGS är särskilt användbart för att detektera mutationer i stora regioner i genomet eller för att identifiera mutationer i en population av celler.
2. Elektrofores:
* Begränsningsfragmentlängd Polymorfism (RFLP): Denna teknik använder restriktionsenzymer, som skär DNA vid specifika sekvenser. Om en mutation ändrar en begränsningsplats kommer storleken på de producerade DNA -fragmenten att förändras. Detta kan visualiseras med gelelektrofores.
* enkelsträngande konformationell polymorfism (SSCP): Denna teknik använder det faktum att enkelsträngade DNA-molekyler med mutationer viks annorlunda. De olika vikta molekylerna migrerar annorlunda på en gel, vilket möjliggör detektion av mutationer.
3. Molekylära analyser:
* allelspecifik oligonukleotid (ASO) Hybridisering: Denna teknik använder korta DNA -prober som är kompletterande med specifika alleler. Prober som matchar den muterade allelen kommer att hybridisera till DNA, medan sonder som matchar vildtypsallelen inte kommer att göra det.
* Polymeraskedjereaktion (PCR) med mutationsspecifika primrar: PCR -primrar är utformade för att specifikt förstärka den muterade allelen. Om mutationen är närvarande kommer PCR -produkten att förstärkas, medan den inte kommer att förstärkas om mutationen är frånvarande.
4. Fenotypisk analys:
* Förändringar i observerbara egenskaper: Vissa mutationer resulterar i observerbara förändringar i organismens fenotyp, såsom förändringar i färg, storlek eller beteende. Dessa förändringar kan användas för att identifiera individer med mutationer.
* funktionella analyser: Detta innebär att man testar aktiviteten hos ett protein eller enzym som kodas av den muterade genen. Om proteinet eller enzymet är icke-funktionellt eller har förändrat aktivitet kan detta användas för att identifiera mutationen.
5. Cellkulturtekniker:
* Immortaliserade cellinjer: Vissa cellinjer kan odlas i labbet och kan användas för att studera mutationer. Dessa cellinjer kan användas för att undersöka effekterna av mutationer på celltillväxt, spridning och andra cellulära processer.
* genredigeringsteknologier: Verktyg som CRISPR-CAS9 kan användas för att införa specifika mutationer i cellinjer, vilket möjliggör studier av effekterna av mutationen.
6. Befolkningsstudier:
* Mutationsfrekvens: Genom att studera frekvensen av mutationer i en population kan biologer identifiera mutationer som är associerade med specifika sjukdomar eller fenotyper.
* Befolkningsgenetik: Befolkningsgenetiska studier kan spåra utvecklingen av mutationer över tid och deras påverkan på befolkningens totala kondition.
Det är viktigt att notera att de metoder som används för att avgöra om en mutation har inträffat kommer att variera beroende på det specifika sammanhanget och forskningsfrågan som behandlas. Att kombinera flera tillvägagångssätt kan ofta ge mer robusta bevis för närvaron av en mutation.
