Principen för analysen av glukos-6-fosfatdehydrogenas (G6PD) är baserad på den enzymatiska reaktionen som katalyseras av G6PD. G6PD är ett enzym som spelar en avgörande roll i pentosfosfatvägen, en metabolisk väg som ansvarar för att generera NADPH, ett reduktionsmedel.
I denna analys katalyserar G6PD oxidationen av glukos-6-fosfat (G6P) till 6-fosfoglukonat (6-PG) med användning av NADP+ som en elektronacceptor. Under denna reaktion reduceras NADP+ till NADPH, som uppvisar en stark absorbans vid 340 nm. Genom att mäta ökningen i absorbans vid 340 nm över tid kan enzymaktiviteten hos G6PD kvantifieras.
Här är de viktigaste stegen som är involverade i G6PD-analysen:
1. Provförberedelse: Ett prov innehållande G6PD, såsom ett cellysat eller vävnadshomogenat, prepareras.
2. Reaktionsblandning: Reaktionsblandningen inkluderar typiskt G6P, NADP+, en buffertlösning och provet innehållande G6PD.
3. Inkubation: Reaktionsblandningen inkuberas vid en specifik temperatur och pH, vilket tillåter den enzymatiska reaktionen att inträffa.
4. Spektrofotometrisk mätning: Reaktionsblandningens absorbans mäts vid 340 nm med användning av en spektrofotometer. Denna absorbansavläsning motsvarar mängden producerad NADPH.
5. Beräkningar: Förändringen i absorbans vid 340 nm över tiden används för att beräkna enzymaktiviteten hos G6PD. Denna beräkning tar hänsyn till extinktionskoefficienten för NADPH och volymen av reaktionsblandningen.
6. Enheter för enzymaktivitet: G6PD-aktivitet uttrycks vanligtvis i enheter per liter (U/L) eller internationella enheter per liter (IU/L), där en enhet enzymaktivitet representerar mängden enzym som krävs för att producera 1 mikromol NADPH per minut under de specificerade analysförhållandena .
Mätningen av G6PD-aktivitet har klinisk betydelse, eftersom brister i G6PD kan leda till ett tillstånd som kallas G6PD-brist, vilket orsakar hemolytisk anemi vid exponering för vissa mediciner eller substanser. G6PD-analyser utförs för att diagnostisera G6PD-brist och övervaka enzymaktivitet hos individer med tillståndet.
