• Home
  • Kemi
  • Astronomien
  • Energi
  • Naturen
  • Biologi
  • Fysik
  • Elektronik
  •  Science >> Vetenskap >  >> Biologi
    Varför skulle en forskare använda högre kontra lägre procent agaroslösning när man förbereder gel för att separera DNA?
    Procentandelen av agaros i en gel bestämmer dess porstorlek . Denna porstorlek påverkar direkt hur DNA -fragment separeras genom elektrofores. Här är varför en forskare kan välja en högre eller lägre procentandel:

    Högre procentuell agaros (t.ex. 1-2%):

    * Mindre porstorlek: Detta möjliggör bättre separering av mindre DNA -fragment . Gelen fungerar som en sikt, fångar mindre fragment längre, vilket får dem att migrera långsammare.

    * Används för:

    * Analysera DNA -fragment mindre än 1000 baspar (BP)

    * Högupplöst separering av små fragment

    * Begränsningsfragmentlängd Polymorfism (RFLP) -analys

    Lägre procentuell agaros (t.ex. 0,5-0,8%):

    * Större porstorlek: Detta möjliggör snabbare migration av större DNA -fragment .

    * Används för:

    * Separera större DNA -fragment (över 1000 bp)

    * Analysera genomiskt DNA

    * Pulsed-fältgelelektrofores (PFGE) för mycket stora DNA-molekyler

    Nyckelöverväganden:

    * Fragmentstorlek: Storleken på DNA -fragmenten du försöker separera är den primära faktorn för att bestämma gelprocenten.

    * Upplösning: Högre procentuella geler ger högre upplösning för att separera små fragment, medan lägre procentuella geler är bättre för att separera stora fragment.

    * Migrationstid: Högre procentuella geler bromsar migrationen och kräver längre körtider. Lägre procentuella geler möjliggör snabbare migration.

    Exempel:

    Om du analyserar produkterna från en restriktionsenzymmältning som innehåller fragment som sträcker sig från 500 till 1000 bp, skulle du sannolikt välja en 1% agarosgel. Om du analyserade genomiskt DNA med fragment som sträcker sig från 50 000 till 100 000 bp, skulle en 0,7% agarosgel vara mer lämplig.

    © Vetenskap https://sv.scienceaq.com