1. Isolera den humana insulingenen:
* Identifiera genen: Forskare var först tvungna att fastställa den exakta DNA -sekvensen som koder för humant insulin. Detta handlade om att studera det mänskliga genomet och förstå strukturen hos insulinproteinet.
* kloning av genen: När genen identifierades använde de tekniker som restriktionsenzymer och plasmider för att skära ut insulingen från humant DNA och sätta in det i ett litet, cirkulärt DNA som kallas en plasmid. Detta skapade en rekombinant DNA -molekyl.
2. Välja en lämplig bakterievärd:
* e. coli som arbetshäst: Bakterien * Escherichia coli * (E. coli) valdes som värdorganism. Det är en väl studerad, lätt manipulerad och snabbt reproducerande bakterie, vilket gör den idealisk för storskalig produktion.
3. Infoga genen i bakterier:
* Transformation: Den rekombinanta plasmiden innehållande den humana insulingenen infördes i E. coli -celler. Denna process, kallad transformation, involverade att skapa förhållanden där bakterierna skulle ta upp plasmiden.
4. Välj för transgena bakterier:
* antibiotikaresistens: Plasmiden innehöll ofta en gen för antibiotikaresistens. Detta gjorde det möjligt för forskare att enkelt identifiera bakterier som framgångsrikt hade tagit upp plasmiden. De skulle växa bakterierna i närvaro av antibiotikumet, och bara de bakterier med plasmiden skulle överleva.
5. Uttrycka insulingenen:
* promotorer och reglering: Plasmiden utformades så att den humana insulingenen skulle uttryckas (aktiveras) inuti E. coli. Detta handlade om att inkludera en promotorsekvens - en DNA -region som säger bakteriemaskineriet att börja läsa och transkribera insulingenen.
6. Producerande och renande insulin:
* storskalig jäsning: De transgena E. coli -bakterierna odlades i stora jäsningstankar, vilket gjorde att de kan producera stora mängder insulin.
* rening: Efter jäsning behövde insulinet som producerades av bakterierna renas från resten av bakteriekomponenterna. Detta involverade olika tekniker som kromatografi och filtrering.
Viktig anmärkning: Detta är en förenklad översikt. Processen involverade många tekniska detaljer, iterationer och utmaningar, och många lysande forskare bidrog till dess framgång.
