Förstå komponenterna:
* enzymet tomt: Detta innehåller allt * utom * underlaget. Syftet är att redogöra för all bakgrundsaktivitet eller absorbans som inte beror på enzymsubstratreaktionen. Detta kan inkludera:
* enzym Auto-aktivitet: Vissa enzymer kan ha en liten aktivitet även i frånvaro av deras specifika substrat.
* icke-enzymatiska reaktioner: Själva buffertlösningen eller andra komponenter i reaktionsblandningen kan bidra till absorbansförändringar.
* underlag: Detta är molekylen som enzymet verkar för att producera en produkt.
* Kombinerad lösning: Detta skulle inkludera både enzymet och substratet.
Varför separata lösningar är avgörande:
1. exakt mätning av den specifika reaktionen: Genom att använda separata ämnen och substrat låter oss isolera och mäta aktiviteten enbart på grund av enzymets interaktion med dess specifika substrat. Vi kan subtrahera bakgrundsaktiviteten uppmätt i tomten från den totala aktiviteten som mäts i den kombinerade lösningen.
2. Eliminera störningar: Att blanda enzymet och substratet i förväg kan leda till:
* För tidig produktbildning: Enzymet kunde börja agera på underlaget innan experimentet börjar, vilket leder till felaktiga resultat.
* enzymnedbrytning: Enzymet kan bli instabilt eller inaktivt om det är förblandat med underlaget under en längre period.
3. Kontroll över reaktionsstart: Genom att tillsätta enzymet och substratet separat får vi kontrollen över det exakta ögonblicket som reaktionen börjar. Detta är viktigt för att studera reaktionens kinetik (hur snabbt den fortsätter).
Exempel:
Föreställ dig att mäta aktiviteten hos ett enzym som bryter ner ett färgat underlag. Om du kombinerar enzymet och substratet kan färgförändringen starta omedelbart, vilket gör det svårt att bestämma reaktionshastigheten. Att använda ett tomt för att redogöra för alla initiala färger och mäta färgförändringen specifikt på grund av enzymets verkan på underlaget ger mer exakta resultat.
Sammanfattningsvis:
Att använda enzymämnen och substrat separat är avgörande för exakta och tillförlitliga enzymaktivitetsmätningar. Denna metod säkerställer att vi endast mäter enzymets specifika aktivitet på dess substrat, eliminerar störningar och möjliggör kontrollerad reaktionsinitiering.
