1. Extrahera intresset
* Begränsningsenzymer: Dessa enzymer fungerar som molekylär sax, känner igen specifika DNA -sekvenser och skär DNA -molekylen på dessa platser. Detta skapar fragment som innehåller den önskade genen.
* vektorer: Dessa är DNA -molekyler som fungerar som bärare för genen av intresse. Vanliga typer inkluderar plasmider (små, cirkulära DNA -molekyler som finns i bakterier) och virala vektorer (modifierade virus som används för att leverera genetiskt material).
* ligasenzymer: Dessa enzymer fungerar som molekyllim och sammanfogar genen av intresse i vektorn.
2. Rekombinera DNA
* DNA -ligas: Som nämnts ovan är detta enzym avgörande för att gå med i genen av intresse i vektorn. Det förseglar luckorna mellan DNA -fragmenten och skapar en stabil rekombinant DNA -molekyl.
Låt oss bryta ner processen:
1. isolering av DNA: DNA som innehåller genen av intresse extraheras från dess källa (t.ex. en växt, djur eller bakteriecell).
2. Skär DNA: DNA behandlas med specifika begränsningsenzymer som skärs vid exakta sekvenser, vilket genererar fragment som innehåller målgenen.
3. Förbereda vektorn: Den valda vektorn (plasmid eller viral) skärs också med samma begränsningsenzym, vilket skapar ett kompatibelt ställe för att infoga genen.
4. Gå med i genen och vektorn: Genfragmentet och den öppnade vektorn blandas ihop. DNA -ligas förenar genen och vektorns ändar och skapar en rekombinant DNA -molekyl.
5. Transformation/transfektion: Den rekombinanta DNA -molekylen införs i en värdcell (t.ex. bakterier). Denna process kallas transformation (för bakterier) eller transfektion (för eukaryota celler).
6. Val och replikering: Värdcellerna som innehåller det rekombinanta DNA väljs och får multiplicera, vilket producerar många kopior av genen av intresse.
Viktig anmärkning: Denna process är grundläggande för genteknik och bioteknik, vilket gör att vi kan skapa organismer med nya egenskaper eller producera värdefulla proteiner för medicinska och industriella tillämpningar.
