1. Erhålla RNA: Det första steget är att isolera RNA från cellerna eller vävnaderna av intresse. Detta kan vara mRNA, som bär den genetiska koden för proteiner, eller andra typer av RNA som rRNA eller tRNA.
2. Omvänd transkription: Det isolerade RNA blandas sedan med omvänd transkriptas och andra nödvändiga komponenter, inklusive:
* primer: En kort sekvens av DNA som binder till en specifik region i RNA -molekylen. Detta fungerar som en utgångspunkt för omvänt transkriptas.
* DNTPS (deoxynukleotid triphosfater): Byggnadsblocken för DNA.
3. DNA -syntes: Omvänt transkriptas använder RNA -mallen och primern för att skapa en kompletterande DNA -sträng (cDNA).
4. cDNA -isolering och amplifiering: Det nyligen syntetiserade cDNA separeras sedan från RNA -mallen. Beroende på applikationen kan den förstärkas med hjälp av tekniker som PCR (polymeraskedjereaktion) för att skapa många kopior.
Så här konverteras denna information:
* RNA till DNA: Nyckelomvandlingen är från RNA till DNA, vilket gör att forskare kan arbeta med den mer stabila DNA -molekylen.
* genuttryck: CDNA -skapat återspeglar nivåerna av RNA som finns i det ursprungliga provet. Denna information kan avslöja vilka gener som aktivt transkriberas och översätts till proteiner.
* genetisk kloning: cDNA kan sättas in i vektorer och klonas i bakterier. Detta möjliggör massproduktion av specifika gener för forskning eller terapeutiska ändamål.
Användning av omvänd transkriptas:
* genuttrycksanalys: Studera vilka gener som är aktiva i olika celler och vävnader.
* Diagnostisk testning: Detektera närvaron av virus som HIV, som har ett RNA -genom.
* genterapi: Leverera terapeutiska gener till celler.
* bioteknik: Skapa proteiner och andra molekyler för terapeutiskt eller industriellt bruk.
Omvänt transkriptas gör det möjligt för forskare att studera och manipulera genetisk information kodad i RNA och öppna upp många möjligheter inom olika områden inom vetenskap och medicin.
