1. Hämning av DNaser :Blod innehåller olika enzymer, inklusive nukleaser, som kan bryta ner DNA om de inte hämmas tillräckligt. Natriumperklorat fungerar som en hämmare av DNaser, särskilt de som kräver magnesium eller kalcium för sin aktivitet. Det binder till dessa metalljoner, vilket förhindrar dem från att delta i enzymkatalyserade reaktioner och skyddar DNA:t från nedbrytning.
2. Proteinfällning :Natriumperklorat används vanligtvis under proteinutfällningssteget vid DNA-isolering. Det tillsätts till ett cellysat eller en cellsuspension för att inducera utfällning av proteiner, inklusive hemoglobin, som finns rikligt i röda blodkroppar. Den höga saltkoncentrationen som skapas av natriumperklorat stör lösligheten av proteiner, vilket får dem att aggregera och bilda en pellet vid centrifugering. Detta gör att supernatanten som innehåller DNA:t kan separeras från de utfällda proteinerna.
3. Nukleinsyrautfällning Natriumperklorat kan också användas för att fälla ut nukleinsyror, inklusive genomiskt DNA, från supernatanten som erhålls efter proteinfällning. Det uppnår detta genom att minska lösligheten av DNA-molekyler. När etanol eller isopropanol tillsätts till supernatanten tillsammans med natriumperklorat blir DNA:t olösligt och bildar en synlig fällning. Denna fällning kan samlas upp genom centrifugering och renas ytterligare för att erhålla rent genomiskt DNA.
4. Borttagning av föroreningar :Natriumperklorat hjälper till att ta bort föroreningar som proteiner, andra makromolekyler och salter från DNA-beredningen. Den höga saltkoncentrationen som uppnås med natriumperklorat hjälper till med effektiv utfällning av föroreningar och lämnar efter sig renat DNA.
5. Optimering av DNA-utbyte och kvalitet :Användningen av natriumperklorat i genomisk DNA-isolering kan optimera både utbytet och kvaliteten på det extraherade DNA:t. Genom att effektivt hämma DNaser förhindrar det DNA-nedbrytning, vilket säkerställer det isolerade DNA:s integritet och höga molekylvikt. Dessutom förbättrar det effektiva avlägsnandet av föroreningar DNA-preparatets totala renhet, vilket gör det lämpligt för olika nedströms molekylärbiologiska tillämpningar.
Sammantaget spelar natriumperklorat en viktig roll i genomisk DNA-isolering från mänskligt blod genom att hämma DNaser, underlätta protein- och nukleinsyrautfällning, ta bort föroreningar och förbättra kvaliteten och utbytet av det isolerade DNA:t.
