Av Marcia Spear
Uppdaterad 24 mars 2022
NikiLitov/iStock/GettyImages
Gramfärgningen är en grundläggande mikrobiologiteknik som skiljer grampositiva från gramnegativa bakterier baserat på deras cellväggsstruktur och resulterande färg. Acetonalkohol spelar en avgörande roll som avfärgningsmedlet, vilket gör att den slutliga färgdifferentieringen avslöjar bakteriell identitet.
Efter att ha berett ett bakterieutstryk appliceras kristallviolett i 30 sekunder. I detta skede ser både grampositiva och gramnegativa celler enhetligt lila ut. En kort tvätt med vatten tar bort överflödigt färgämne, även om en del kristallviolett förblir bunden till de tjocka peptidoglykanskikten av grampositiva celler.
Jod tillsätts i en minut och fungerar som ett betsmedel som binder till kristallviolett och bildar ett olösligt kristallviolett-jodkomplex. Detta komplex fäster starkt vid den robusta peptidoglykanen från grampositiva bakterier och säkrar den primära fläcken utan efterföljande vattensköljning.
Aceton eller etylalkohol används i 10–20 sekunder för att avlägsna kristallviolett-jodkomplexet från gramnegativa celler. Alkoholen löser upp det yttre lipidmembranet, vilket gör att färgämnet kan fly det tunnare peptidoglykanskiktet. Efter att avrinningen är färglös stoppar en vattensköljning avfärgningen. Grampositiva celler behåller den lila fläcken, medan gramnegativa celler blir färglösa.
Safranin appliceras i cirka en minut för att ge kontrast och färgar den nu färglösa gramnegativa bakterien rosa. Den mörkare kristallvioletta masken säkerställer att grampositiva celler förblir lila. En sista vattensköljning tar bort överflödigt safranin.
